工作原理

　　細(xì)胞RNA免提取試劑盒通過優(yōu)化裂解體系與逆轉(zhuǎn)錄（RT）反應(yīng)的兼容性，實(shí)現(xiàn)從細(xì)胞樣本直接獲取可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的RNA模板，省略了傳統(tǒng)RNA提取中的純化步驟。其核心原理包括：

　　高效裂解與RNA保護(hù)：

　　裂解液中含有的表面活性劑（如SDS）和胍鹽類物質(zhì)（如異硫氰酸胍）可快速破壞細(xì)胞膜和核膜結(jié)構(gòu)，釋放細(xì)胞內(nèi)RNA。同時，這些成分通過螯合金屬離子（如Mg²?）抑制RNA酶活性，防止RNA降解。部分試劑盒還添加了RNA穩(wěn)定劑，確保RNA在高溫或長時間保存下的完整性。

　　兼容逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：

　　裂解液配方經(jīng)過特殊設(shè)計(jì)，使其與逆轉(zhuǎn)錄酶及dNTP等RT反應(yīng)組分兼容。通過調(diào)整pH值、離子強(qiáng)度或添加特殊添加劑，避免裂解液中的成分干擾逆轉(zhuǎn)錄酶活性，從而可直接以裂解產(chǎn)物為模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。

　　基因組DNA去除：

　　部分試劑盒整合了DNA酶（如DNaseI）或通過化學(xué)修飾（如添加螯合劑）去除基因組DNA污染，確保后續(xù)實(shí)驗(yàn)僅檢測RNA，避免假陽性結(jié)果。

　　技術(shù)優(yōu)勢

　　操作簡便高效：

　　傳統(tǒng)RNA提取需經(jīng)過細(xì)胞裂解、RNA純化、洗滌、洗脫等多步操作，耗時6-8小時。而免提取試劑盒將流程縮短至3小時內(nèi)，僅需裂解細(xì)胞、逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增三步，顯著提高實(shí)驗(yàn)效率。

　　靈敏度高：

　　可檢測低至10拷貝的RNA分子，且對小RNA（如miRNA）的捕獲效率達(dá)90%以上，滿足痕量RNA檢測需求。

　　樣本需求量低：

　　每次實(shí)驗(yàn)僅需10-100,000個細(xì)胞，適用于稀有細(xì)胞樣本（如循環(huán)腫瘤細(xì)胞）或微量組織樣本（如激光捕獲顯微切割樣本）。

　　結(jié)果穩(wěn)定可靠：

　　通過嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系，確保不同批次間實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性（RSD值<3%），且A260/A280比值（反映RNA純度）穩(wěn)定在1.8-2.1之間。

　　應(yīng)用場景

　　臨床診斷：

　　病毒載量檢測：如新冠病毒核酸檢測中，直接處理鼻咽拭子裂解液，結(jié)合RT-qPCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)快速診斷，檢測通量可達(dá)96樣本/2小時。

　　腫瘤研究：

　　腫瘤標(biāo)志物篩查：分析腫瘤組織中mRNA水平變化，發(fā)現(xiàn)潛在的致癌基因或抑癌基因，為個性化醫(yī)療提供依據(jù)。

　　單細(xì)胞分析：結(jié)合激光捕獲顯微切割技術(shù)，實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞水平的RNA分析，揭示腫瘤異質(zhì)性。

　　基因表達(dá)研究：

　　差異表達(dá)分析：比較不同生理狀態(tài)或處理?xiàng)l件下基因的表達(dá)模式，探究基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。

　　非編碼RNA研究：檢測miRNA、lncRNA等非編碼RNA的表達(dá)變化，揭示其在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用。

　　高通量藥物篩選：

　　兩步法RT-PCR設(shè)計(jì)使cDNA產(chǎn)物可靈活用于SYBRGreen或TaqMan等多種定量PCR平臺，滿足高通量藥物篩選需求。

　　性能驗(yàn)證

　　第三方對比實(shí)驗(yàn)表明，免提取試劑盒的RNA回收率（85%-92%）與傳統(tǒng)TRIzol法（90%-95%）接近，但操作時間縮短70%。在重復(fù)性測試中，10批次間A260/A280比值的RSD值<3%，證明其穩(wěn)定性符合臨床診斷要求。目前，該技術(shù)已通過ISO13485醫(yī)療設(shè)備質(zhì)量管理體系認(rèn)證，在科研和臨床領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。